郑福超¹ , 耿兴敏^1* , 谷康¹ , 闫娜² , 罗凤霞 ² , 肖丽燕¹

1 南京林业大学风景园林学院, 南京, 210037; 2 金陵科技学院园艺学院, 南京, 210038
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《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 19 篇   
收稿日期: 2017年04月20日    接受日期: 2017年06月09日    发表日期: 2018年06月22日

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本试验以马银花(R. ovatum) DNA 为模板，采用 L16 (45)正交试验对目标起始密码子多态性 - 聚合酶链式反应(SCoT-PCR)体系中 5 因素(Taq 聚合酶用量, Mg2+ 浓度, 模板 DNA 用量, dNTPs 浓度, 引物浓度)进行了优化，建立了杜鹃花植物 SCoT-PCR 反应体系。结果表明，在 20 滋L 的反应体系中，模板DNA 1.00 ng/滋L，Mg2+ 为 3.00 mmol/L，dNTPs 为 0.25 mmol/L，引物为 0.50 滋mol/L，Taq DNA 聚合酶为 2.00 U。比较了各因素对反应体系的影响，发现引物物浓度的差异对体系影响显著，各因素影响的先后顺序为引物>Taq DNA 聚合酶>dNTPs>Mg2+>模板 DNA。并运用了杜鹃属的 4 个不同种对最优体系进行了稳定性验证，选择了 10个通用性的引物进行筛选，发现 10 个引物均能扩增出条带，其中有 6 个引物能够得到清晰可辨、多态性丰富的条带。该体系的建立将为杜鹃花遗传多样性、差异基因的表达分析，分子辅助育种、遗传图谱构建等研究提供技术支持。

杜鹃花；SCoT；PCR；单因子；正交试验