卢超 , 艾伦强 , 张美德 , 何银生 , 刘海华

湖北省农业科学院中药材研究所, 湖北省农业科技创新中心中药材研究分中心, 湖北省中药材规范化种植(GAP)工程技术研究中心, 恩施, 445000
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2017 年, 第 15卷, 第 47 篇   
收稿日期: 2017年04月19日    接受日期: 2017年06月05日    发表日期: 2017年06月12日

这是一篇采用Creative Commons Attribution License进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许和同意第三方无条件的使用与传播。

      利用两轮混合均匀设计的方法，研究引物、2×Taq master mix、模板DNA以及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响，在此基础上获得优化的川续断ISSR反应体系，为后续开展川续断的遗传多样性分析奠定基础。试验显示川续断ISSR-PCR最佳反应体系为：在18 μL的反应体系中含有2×Taq Master Mix 10.44 μl，模板DNA 45 ng，引物0.35 μM。在此基础上，从100条引物中筛选出5条扩增较稳定、多态性丰富的引物，随后进行的温度梯度PCR实验发现引物最佳退火温度介于45℃~58℃之间。该试验表明采用混合均匀设计和单因素试验相结合的方法，可以减少实验处理次数，快速建立ISSR反应体系，经过对9份川续断种质资源进行ISSR扩增检测，证明该体系稳定可靠，可用于川续断遗传多样性分析。

ISSR；分子标记；川续断；体系优化