林景卫

作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2017 年, 第 15卷, 第 0 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

为了探究金针菇FIP-fve基因对金针菇本身的生物学功能，本文克隆FIP-fve基因正反片段并构建其RNAi载体,并将其转化农杆菌LBA4404，建立以农杆菌介导的金针菇遗传转化体系。双酶切琼脂糖电泳检测结果表明成功构建了FIP-fve基因的RNAi载体：pTCK303-fve(F)-fve(R)，并用液氮转化法获得重组农杆菌转化子。金针菇遗传转化以菌丝体为外植体，潮霉素B(Hygromycin B)和头孢霉素(Cephalosporins)使用浓度分别为9 μg/mL和600 μg/mL。重组农杆菌浓度OD₆₀₀为0.5，侵染金针菇菌丝体30 min，共培养培养基AS使用浓度为200 μmol/L，共培养25℃ 3d，抗性筛选10d。最终通过潮霉素抗性筛选和PCR检测从60个外植体中筛选得到5个金针菇遗传转化子,转化率为8.33%。经过连续培养,对比观测转化子和野生型金针菇,FIP-fve基因沉默的金针菇转化子菌丝的生长在第3d、第6d和第10d明显慢于野生型金针菇菌丝。初步说明FIP-fve基因对金针菇菌丝体时期的生长发育具有一定调节作用,这为研究金针菇