成彦丽 , 仲维平 , 郝自远 , 李火根

南京林业大学南方现代林业协同创新中心, 南京, 210037
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2017 年, 第 15卷, 第 10 篇   
收稿日期: 2016年11月08日    接受日期: 2016年12月07日    发表日期: 2017年05月29日

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本研究以北美鹅掌楸为试验材料，从北美鹅掌楸和鹅掌楸转录组数据库中挖掘出37条CCD基因家族的EST序列，并将这些序列归类于CCD基因家族中。以其中一条预测为CCD1的EST序列为基准设计引物，通过反转录PCR (RT-PCR)与cDNA末端快速扩增 (RACE) 技术从北美鹅掌楸中克隆得到一条全长为1 929 bp的序列，命名为LtCCD1基因。该基因包含102 bp 5′端、177 bp 3′端非翻译区序列和1650bp的开放阅读框，共编码549aa。LtCCD1基因与多个物种CCD1基因相似度大于80%，其编码的蛋白质拥有CCD基因家族典型的结构域RPE65。系统发育分析发现，LtCCD1基因编码的蛋白质与Anthurium amnicola、Crocus ancyrensis和番红花的CCD1基因编码的蛋白质亲缘关系较近。LtCCD1蛋白质分子量为61.96 kDa，等电点为6.10，属酸性蛋白；无规则卷曲是该蛋白质二级结构的主要成分。利用在线软件TargetP进行亚细胞定位预测并结合CCD1蛋白在其它植物中的定位信息，推测该蛋白可能位于细胞质内。使用实时荧光定量PCR技术对该基因进行组织特异性表达分析，发现LtCCD1基因在北美鹅掌楸的花瓣、花萼、雄蕊、雌蕊、花芽、叶、叶芽、茎8个组织中均有表达，表达量从大到小的顺序依次为：叶、花萼、花瓣、茎、雌蕊、叶芽、花芽、雄蕊。该研究结果可为进一步分析北美鹅掌楸中CCD1基因的功能奠定基础。

北美鹅掌楸；CCD1基因；克隆；序列分析；表达