陈洪举^1,2 , 张浩² , 高乐² , 何鹏² , 韦家少² , 吴炳孙² , 张银东¹

1海南大学农学院, 海口, 570228; 2中国热带农业科学院橡胶研究所, 儋州, 571737
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《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14卷, 第 105 篇   
收稿日期: 2016年10月25日    接受日期: 2016年11月15日    发表日期: 2016年11月18日

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缺磷是影响橡胶树产量的主要因素之一，蛋白泛素化在其中发挥了重要作用。为研究泛素化在橡胶树低磷胁迫中的调控作用，本研究分别以巴西橡胶树 “热研7-33-97”组培苗地上部和地下部为材料，构建酵母双杂交文库，并对其进行了评价。首先用CTAB法大量提取橡胶树地上部和地下部总RNA，再用PROMEGA试剂盒处理获得纯化的mRNA，然后采用SMART^®技术和LD-PCR合成双链cDNA(ds-cDNA)，继而通过双链特异性核酸酶(DSN)对ds-cDNA进行均一化处理，再经CHROMA SPIN+TE-400柱子纯化长片段的cDNA，最后将获得的长片段cDNA和线性化载体pGADT7-Rec共转化酵母Y187感受态细胞，构建均一化酵母双杂交文库。结果显示：地上部文库滴度8×10⁷ cfu/mL，插入片段≥0.5 kb的重组率为100%；地下部文库滴度7×10⁷ cfu/mL，插入片段≥0.5 kb的重组率为87%。该结果表明文库已成功构建，可以用于进一步实验。

巴西橡胶树；地上部和地下部；酵母双杂交cDNA文库；均一化