刘勇强 , 王熙然 , 叶云天 , 娄可飞 , 陈清 , 汤浩茹

四川农业大学园艺学院, 成都, 611130
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14卷, 第 37 篇   
收稿日期: 2016年04月08日    接受日期: 2016年05月09日    发表日期: 2016年07月21日

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紫外线B(UV-B)对于植物生长发育具有重要调节作用，其中UV RESISTANCE LOCUS 8蛋白作为UV-B的光受体在植物响应UV-B过程中起关键作用。草莓是一种重要的经济果树，目前关于草莓的UV-B光受体报道较少。为研究草莓中UV-B受体蛋白，本研究采用同源克隆的方法获得‘丰香’草莓中编码UV-B光受体蛋白的cDNA序列，进行了生物信息学的分析并构建了原核生物表达载体pET32a-UVR8，利用中心点响应面法优化了重组蛋白的诱导条件(包括诱导温度、IPTG 浓度、菌液浓度和诱导时间)。结果表明：克隆得到了编码草莓UVR8蛋白的全长cDNA序列，命名为FaUVR8，生物信息学分析表明该序列长1 317 bp，编码438个氨基酸，预测分子量为47.28 kD，等电点pI为5.85，重建蛋白质三维结构表明该蛋白包含7个β-片状螺旋结构；原核表达得到69.7 kD的融合蛋白，对四个诱导条件优化表明将工程菌培养至菌液OD₆₀₀=0.7，加入浓度为0.55 mmol/L的IPTG，在27.72℃下诱导9 h，可获得最大量重组蛋白79 μg/mL。研究结果可为后期寻找与FaUVR8蛋白互作的下游蛋白，以及进一步开展其功能研究提供参考。

草莓；FaUVR8；生物信息学；原核表达