程西永 , 王晓晓 , 苏鹏 , 董中东 , 任妍 , 詹克慧 , 许海霞

河南农业大学, 小麦玉米作物学国家重点实验室, 河南粮食作物协同创新中心, 郑州, 450002
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14卷, 第 26 篇   
收稿日期: 2016年02月26日    接受日期: 2016年03月22日    发表日期: 2016年07月29日

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以普通六倍体小麦品种德抗961为材料，根据野大麦HbCIPK2的mRNA序列(GenBank序列号JN831652)设计引物，采用同源克隆方法从小麦中克隆TaCIPK2基因(GenBank序列号KU640381)，测序结果显示该基因序列全长1 421 bp，开放阅读框(ORF) 1 359 bp，编码452个氨基酸残基，预测分子量为50.91 kD，pI为9.07。氨基酸序列比对结果表明：该基因与HvCIPK2 (KP638475.1)、TaCIPK2 (KJ561791.1)、HbCIPK2 (JN831652.1)的相似度分别为94.69%、96.93%、95.80%，具有高度同源性；系统进化分析表明它们位于相同进化支上，亲缘关系最近。采用Real-time PCR方法分析不同逆境胁迫处理下TaCIPK2基因表达的特异性，200 mM NaCl高盐胁迫处理小麦幼苗后根和叶部TaCIPK2基因均上调表达；4℃低温胁迫处理后根部TaCIPK2基因上调表达，而叶部下调表达；100 μM ABA胁迫处理后根和叶中TaCIPK2均上调表达。为检测TaCIPK2与TaCBL1、TaCBL2、TaCBL6、TaCBL7的相互作用，构建酵母表达载体pGADT7-TaCIPK2，转化酵母Y187感受态细胞；同理pGBKT7-TaCBL1、pGBKT7-TaCBL2、pGBKT7-TaCBL6、pGBKT7-TaCBL7转化到酵母细胞Y2Hgold中，都没有出现自激活活性和毒性现象。共转化的二倍体酵母，只有pGADT7-TaCIPK2×pGBKT7-TaCBL2和pGBKT7-53×pGADT7-T在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal/AbA培养基板上长出的菌落呈现蓝色，说明TaCIPK2能够与TaCBL2相互作用，激活下游报告基因HIS3、AUR1-C、MEL1和ADE2的表达，该研究结果对进一步研究TaCIPK2的功能有一定的指导意义。

基因克隆；TaCIPK2； TaCBLs；酵母双杂交