研究报告/Research Report

小麦TaCIPK2基因克隆及与TaCBLs蛋白互作分析  

程西永 , 王晓晓 , 苏鹏 , 董中东 , 任妍 , 詹克慧 , 许海霞
河南农业大学, 小麦玉米作物学国家重点实验室, 河南粮食作物协同创新中心, 郑州, 450002
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14卷, 第 26 篇   
收稿日期: 2016年02月26日    接受日期: 2016年03月22日    发表日期: 2016年07月29日
© 2016 BioPublisher 生命科学中文期刊出版平台
这是一篇采用Creative Commons Attribution License进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用,版权所有人允许和同意第三方无条件的使用与传播。
摘 要

以普通六倍体小麦品种德抗961为材料,根据野大麦HbCIPK2的mRNA序列(GenBank序列号JN831652)设计引物,采用同源克隆方法从小麦中克隆TaCIPK2基因(GenBank序列号KU640381),测序结果显示该基因序列全长1 421 bp,开放阅读框(ORF) 1 359 bp,编码452个氨基酸残基,预测分子量为50.91 kD,pI为9.07。氨基酸序列比对结果表明:该基因与HvCIPK2 (KP638475.1)、TaCIPK2 (KJ561791.1)、HbCIPK2 (JN831652.1)的相似度分别为94.69%、96.93%、95.80%,具有高度同源性;系统进化分析表明它们位于相同进化支上,亲缘关系最近。采用Real-time PCR方法分析不同逆境胁迫处理下TaCIPK2基因表达的特异性,200 mM NaCl高盐胁迫处理小麦幼苗后根和叶部TaCIPK2基因均上调表达;4℃低温胁迫处理后根部TaCIPK2基因上调表达,而叶部下调表达;100 μM ABA胁迫处理后根和叶中TaCIPK2均上调表达。为检测TaCIPK2与TaCBL1、TaCBL2、TaCBL6、TaCBL7的相互作用,构建酵母表达载体pGADT7-TaCIPK2,转化酵母Y187感受态细胞;同理pGBKT7-TaCBL1、pGBKT7-TaCBL2、pGBKT7-TaCBL6、pGBKT7-TaCBL7转化到酵母细胞Y2Hgold中,都没有出现自激活活性和毒性现象。共转化的二倍体酵母,只有pGADT7-TaCIPK2×pGBKT7-TaCBL2和pGBKT7-53×pGADT7-T在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal/AbA培养基板上长出的菌落呈现蓝色,说明TaCIPK2能够与TaCBL2相互作用,激活下游报告基因HIS3AUR1-CMEL1ADE2的表达,该研究结果对进一步研究TaCIPK2的功能有一定的指导意义。

关键词
基因克隆;TaCIPK2; TaCBLs;酵母双杂交
[全文 PDF]
《分子植物育种》印刷版
• 第 14 卷
阅览选项
. PDF(0KB)
. 全文 HTML
读者评论
. 评论
作者的其他论文
.
程西永
.
王晓晓
.
苏鹏
.
董中东
.
任妍
.
詹克慧
.
许海霞
相关论文
.
基因克隆
.
TaCIPK2
.
TaCBLs
.
酵母双杂交
服务
. Email 推荐给朋友
. 发表评论