向小利 , 余桂容 , 宋军 , 徐利远 , 杜文平 , 陈谦 , 赵成昊 , 潘光堂

1 四川省农业科学院, 成都, 610061; 2 四川农业大学玉米研究所, 成都, 611130; 3 丹东农业科学院玉米研究所, 凤城, 118109
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14卷, 第 1 篇   
收稿日期: 2016年01月12日    接受日期: 2016年02月01日

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本研究构建了带有His标签的拟南芥 (Arabidopsis thaliana) SAT1基因原核表达载体pET-30b(+)-SAT1-His_（6）。采用了能够降低目的蛋白背景表达水平的大肠杆菌 (Escherichia coli BL21(DE3) pLysS) 诱导表达体系，将超声波破碎细胞，His-trip柱纯化，咪唑洗脱并用Millipore公司的超滤管去盐浓缩后的SAT1融合蛋白，经免疫兔子，成功制备了SAT1蛋白多克隆抗体，并通过Western blotting检验其灵敏性。结果表明，成功构建的拟南芥SAT1原核表达载体，在E. coli中以0.1 mmol/L 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷 (IPTG) 30℃诱导表达6 h后，融合蛋白得到较高水平，并能用250 mmol/L的咪唑从His-trip吸附柱中洗脱，所制备的多克隆抗体具有较高特异性和灵敏性，可用来检测转AtSAT1基因的转基因玉米株系中SAT1蛋白的积累量。

拟南芥；丝氨酸乙酰转移酶； 原核表达；多克隆抗体