田迪 , 刘早利 , 陈亚红 , 王春台 , 刘新琼^*

中南民族大学生命科学学院, 武汉, 430073
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2016 年, 第 14卷, 第 24 篇   
收稿日期: 2015年10月29日    接受日期: 2016年11月24日

这是一篇采用Creative Commons Attribution License进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许和同意第三方无条件的使用与传播。

水稻P450基因家族成员CYP81A6参与稻瘟病抗性反应，为了深入研究该基因的功能，本研究利用3次克隆的策略构建了该基因的RNAi载体。首先设计带有酶切位点的基因特异性引物，以cDNA为模板扩增3’非翻译区的特异片断，将目的产物连接到T载体上，经菌落PCR和酶切鉴定后进行测序。测序结果表示，目的片断已正确克隆到T载体上。然后利用双酶切通过2次亚克隆将目的片断以反向重复克隆到RNAi载体ds1301，通过分子检测表明，CYP81A6的RNAi载体构建成功，有助于后续的基因功能和作用机理的研究。

水稻；CYP81A6；RNA干涉；基因克隆