李元玉上标¹ , 杨颖博上标⁴ , 张国宁上标² , 李姝诺上标² , 马雪祺上标² , 陈万生上标^1,2,3 , 肖莹上标^2*

1福建中医药大学药学院,福州, 350122; 2上海中医药大学中药资源与生物技术中心,上海, 201203; 3海军军医大学附属长征医院医学保障中心,上海, 200003; 4上海图锋医药科技有限公司,上海, 201203
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《分子植物育种》印刷版, 2022 年, 第 20卷, 第 1 篇   
收稿日期: 2021年06月09日    接受日期: 2021年07月22日    发表日期: 2022年09月23日

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咖啡酰辅酶 A氧甲基转移酶是植物中参与木脂素前体松柏醇生物合成的关键酶，为了研究菘蓝中CCoAOMT 的表达特征，采用 cDNA末端快速扩增(RACE)、PCR克隆IiCCoAOMT 的全长 cDNA及其基因组DNA序列；通过 RT-qPCR检测比较IiCCoAOMT 在四倍体菘蓝和二倍体菘蓝各器官中的表达以及不同胁迫刺激下的表达情况。IiCCoAOMT 的 cDNA序列全长 1 098 bp (GenBank登录号: DQ115904)，含 774 bp的开放阅读框(ORF)，编码 257个氨基酸残基，对应的 DNA序列含有 5个外显子和 4个内含子。多重序列比对结果显示IiCCoAOMT与拟南芥AtCCoAOMT同源性最高，且含有植物氧甲基转移酶 -I的三个特征元件：motif A、motif B、motif C。在两种倍性菘蓝的根和叶中，四倍体表达量高于二倍体，而在两种倍性菘蓝的茎中表达量接近相同。冷处理(4℃)、盐处理(NaCl)、茉莉酸甲脂(MeJA)、赤霉素(GA3)、脱落酸(ABA)和水杨酸(SA)均能诱导IiCCoAOMT 表达水平的上调。首次从菘蓝中克隆得到IiCCoAOMT 并进行了表达特征研究，为进一步阐明菘蓝多倍性优势的分子机制提供理论基础，也为通过基因工程技术提高菘蓝中活性木脂素的含量提供了条件。
 

菘蓝(Lsatis indigotica)；咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶；基因克隆；表达分析；RACE