孙博¹ , 卜媛媛¹ , 高野哲夫² , 柳参奎¹

1 东北林业大学东北油田盐碱植被恢复与重建教育部重点实验室, 盐碱地生物资源环境研究中心, 哈尔滨, 150040;
2 东京大学亚洲生物资源环境研究中心, 东京, 188-0002
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13卷, 第 25 篇   doi: 10.13271/j.mpb.013.000887
收稿日期: 2014年09月23日    接受日期: 2014年12月28日    发表日期: 2015年03月12日

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本课题组在前期的研究中利用AlCl3胁迫筛选碱茅全长cDNAs酵母表达文库获得到一个与铝毒害相关的未知基因(基因编号为018, 用put018表示)，该基因与拟南芥中未知基因(基因号为At5g57345, 本研究中用At018表示)有较高的同源性。为了获得At018的纯化蛋白，本研究将拟南芥At018基因克隆后构建原核表达载体pGEX-6p-3-At018，再将其转入大肠杆菌BL21 (DE3)菌株，利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。同时运用传统方法优化诱导条件，以提高重组融合蛋白的表达效率。SDS-PAGE分析结果表明，30℃下0.1 mmol/L IPTG的条件下诱导3 h后，GST-At018融合蛋白的表达量最大，蛋白分子质量与预测值相符，该蛋白主要以可溶性形式存在；接着利用Glutathione Sepharose4 Fast Flow亲核层析树脂纯化最终获得GST-At018融合蛋白。本研究可为进一步进行At018的功能解析提供基础。

拟南芥；At018基因；原核表达；蛋白纯化