林宗梅 , 佟硕秋 , 黄璐 , 吴秀双 , 吴拥军^*

贵州大学生命科学学院, 农业生物工程研究院,山地植物资源保护与保护种质创新教育部重点实验室,山地生态与农业生物工程协同创新中心,贵阳, 550025
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19卷, 第 8 篇   
收稿日期: 2020年12月02日    接受日期: 2020年12月07日    发表日期: 2021年06月26日

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IspH 基因作为 MEP途径中的关键酶具有促进下游萜类化合物产量的积累和提高植物对外界的抵御能力的特定作用，本研究旨在通过对烟草中IspH 基因进行克隆与原核表达分析，从野生型烟草中提取总RNA，通过 RT-PCR克隆获得IspH 基因的 cDNA序列(NCBI登录号: KC480443)，序列分析表明，IspH 基因的开放阅读框(ORF)长为 1 386 bp，编码 461个氨基酸，其编码的蛋白具有 LytB个高度保守结构域；通过构建 pET28a-IspH 原核表达载体，转化到Escherichia coli BL21 (DE3)中，经 IPTG诱导、SDS-PAGE电泳和Western Blot检测 IspH蛋白，与预期大小一致约为 51 kD，浓度为 0. 410 mg/mL，且纯度达到 90%以上。目的蛋白的成功表达为进一步研究IspH 基因在植物发育和抗逆性中的功能研究提供理论参考和数据支持。
 

烟草；IspH；原核表达；生物信息学分析