王宇翔^1,2 , 杨星星¹ , 刁艳茹¹ , 刘红东¹ , 王英^1* , 庄南生¹ , 高和琼¹

1 海南大学热带作物学院, 海口, 570228; 2 中国热带农业科学院橡胶研究所, 儋州, 571737
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19卷, 第 36 篇   
收稿日期: 2020年11月25日    接受日期: 2020年12月04日    发表日期: 2021年09月25日

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高质量单细胞的获得且进行高效率的扩增是单细胞测序的前提，而植物细胞因为存在细胞壁使得单细胞扩增变得困难。本研究以巴西橡胶树‘热研 7-33-97’幼嫩雄花为试验材料，使用 5 种不同的酶液在不同的时间和渗透压稳定剂下探索获得高质量且易扩增的巴西橡胶树小孢子单细胞，同时对单细胞扩增过程进行相应的探索优化。结果表明，使用 8%纤维素酶+6%果胶酶+3%蜗牛酶混合酶，0.6 mol/L 甘露醇作为渗透压稳定剂，37 ℃酶解 45 min 后可以得到品质优良的巴西橡胶树小孢子单细胞；单细胞扩增过程确定细胞裂解酶用量为 0.5 μL，细胞裂解时间为 80 min，预扩增循环数为 10 个循环，可以得到准确且覆盖度高的单细胞扩增产物，经 Dot-blot 杂交验证其确实来自于巴西橡胶树基因组。本研究为后续巴西橡胶树单细胞全基因组测序，构建巴西橡胶树高分辨 SNP 遗传图谱提供基础性技术支持。

巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)；四分体；单细胞扩增；Dot-blot 杂交