陶鹏¹ , 黄小云^1,2 , 李必元¹ , 王五宏¹ , 岳智臣¹ , 雷娟利¹ , 钟新民¹

1 浙江省农业科学院蔬菜研究所，杭州，310021；
2 南京农业大学园艺学院，南京，210095
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13卷, 第 13 篇   doi: 10.13271/j.mpb.013.000338
收稿日期: 2014年07月03日    接受日期: 2014年09月02日    发表日期: 2014年10月07日

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获得叶绿体基因组定点整合表达载体是开展结球甘蓝叶绿体基因组的遗传转化研究的第一步。本研究克隆了CMS结球甘蓝的抗冻蛋白KIN基因，发现该基因定位于结球甘蓝的2号染色体上。通过构建中间载体pKA和pAI，将KIN基因的编码区构建到了CMS结球甘蓝叶绿体基因组定点整合表达载体pIKAA中。该载体以TrnA和TrnI基因片段作为同源整合片段，能整合到CMS结球甘蓝叶绿体基因组中。此外，该载体是双顺反子形式的，即在转录的单条mRNA上，同时包含了KIN和aadA基因编码区。将pIKAA转化到大肠杆菌中，结果显示转化有该载体的大肠杆菌能够在含有氨苄青霉素(AMP)和壮观霉素(SPEC)的固体LB平板中生长。研究结果可为后期CMS结球甘蓝叶绿体基因组的遗传转化体系的建立奠定基础。 

细胞质雄性不育系；结球甘蓝；KIN基因；叶绿体基因组；定点整合表达载体