孙迪^1,2 , 沈文涛² , 庹德财² , 唐庆华³ , 言普² , 黎小瑛² , 李娟玲^1* , 周鹏^1*

1 海南大学园艺学院, 海口, 570228; 2 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 海南热带农业资源研究院, 海口, 571101; 3 中国热带农业科学院椰子研究所, 文昌, 571339
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《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19卷, 第 21 篇   
收稿日期: 2020年08月11日    接受日期: 2020年08月16日    发表日期: 2021年08月16日

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槟榔坏死环斑病毒(areca palm necrotic ringspot virus, ANRSV)是新发现的一种槟榔黄化病致病病毒。本研究利用马铃薯 X 病毒(potato virus X, PVX)表达载体 pgR107，在烟草中表达 ANRSV 的外壳蛋白(coat protein, CP)，旨在分离纯化该蛋白并开展对病毒蛋白的功能研究和利用该蛋白制备多克隆抗体。为方便纯化，将 8 肽 Strep 蛋白标签序列融合到 ANRSV-CP 编码基因的 3' 端，利用 In-Fusion 无缝克隆策略将其克隆到 PVX 载体，构建重组表达质粒 PVX-ANRSV-CP-Strep。采用电转化法将质粒 PVX-ANRSV-CP-Strep转入根瘤农杆 菌 GV3101 中，通过农杆菌介 导注射侵染接种本 氏烟，14 d 后对收 集的 16 g 表 达
ANRSV-CP-Strep 蛋白、PVX 侵染的本生烟草样品进行了蛋白提取，采用 SDS-PAGE 和 Western blot 检测ANRSV-CP-Strep 蛋白的表达情况。测序结果显示植物病毒表达载体 PVX-ANRSV-CP-Strep 构建成功。经Strep-Tactin誖 XT High Capacity 亲和层析柱纯化，SDS-PAGE 和 Western blot 检测结果显示 ANRSV-CP-Strep重组蛋白可通过 PVX 载体在烟草中有效表达，其表达量为 22 滋g/g (鲜叶质量)。本研究为后续利用该蛋白制备多克隆抗体并建立 ELISA 方法进行病毒检测提供了理论依据。
 

槟榔坏死环斑病毒(Areca palm necrotic ringspot virus)；真核表达；载体构建；蛋白纯化