李玉洁^1* , 南奇延^2* , 金美玉¹ , 曹后男¹ , 山本義治³ , 赵成日^1**

1延边大学农学院,延吉, 133002; 2延边大学附属医院,延吉, 133000; 3岐阜大学,岐阜, 5011193,日本
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《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19卷, 第 18 篇   
收稿日期: 2020年07月07日    接受日期: 2020年07月10日    发表日期: 2021年08月21日

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在载体 yy449的 CaMV 35S minimal启动子序列与LUC 基因序列之间增加BglⅡ限制性内切酶位点，构建 yy621载体。用 PCR的方法分别扩增 CaMV 35S minimal启动子序列与LUC 基因。引物设计要满足如下条件：CaMV 35S minimal启动子序列扩增片段的上游应包括BamHⅠ、下游应包括BglⅡ限制性内切酶位点；LUC 基因序列扩增片段的上游应包括BglⅡ、下游应包括XbaⅠ限制性内切酶位点。以上两个片段先用BglⅡ限制性内切酶消化后进行连接，得到 CaMV 35S minimal启动子序列与LUC 基因序列之间含BglⅡ限制性内切酶的识别位点的片段，然后再用BamHⅠ和XbaⅠ限制性内切酶进行消化，插入到载体 yy449的BamHⅠ和XbaⅠ酶切位点之间，替换原有的 CaMV 35S minimal启动子序列与LUC 基因序列。经菌落筛选、PCR鉴定和测序验证，阳性菌落中的 CaMV 35S minimal启动子序列与LUC 基因序列之间包含BglⅡ限制性内切酶的识别位点，载体 yy621构建成功。本实验中构建的荧光素酶表达载体 yy621，适于今后用抗性相关基因替换LUC 基因，测定合成启动子对抗性相关基因的具体调控与赋予植物对不良环境的具体抗性表现，或者用全长启动子序列替换 CaMV 35S minimal启动子序列(-46~+1)，对进一步观察LUC 基因的表达调控具有重要的意义。

荧光素酶；yy621载体；构建