杨晓霞 , 郑健 , 冷平生 , 王羽 , 王宇婷

北京农学院园林学院, 北京, 102206
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2014 年, 第 12卷, 第 25 篇   doi: 10.13271/j.mpb.012.001018
收稿日期: 2014年04月28日    接受日期: 2014年07月02日    发表日期: 2014年08月03日

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为建立暴马丁香ISSR-PCR最佳反应体系，本研究以暴马丁香基因组DNA为模板，首先通过单因子试验设计筛选出各影响因子比较适宜的浓度范围，再利用正交试验，对暴马丁香ISSR-PCR反应有影响的模板DNA、dNTPs、Mg²⁺、Taq DNA聚合酶和引物浓度等5种因素4个水平进行了优化试验。暴马丁香的ISSR-PCR最佳反应体系最终确定为：在25 μL的反应体系中，DNA模板是40 ng，Mg²⁺浓度为2.0 mmol/L，引物浓度为0.4 μmol/L，Taq DNA聚合酶用量为1.5 U，dNTPs浓度为0.2 mmol/L。利用该体系从60条ISSR引物中筛选出了扩增条带清晰、多态性好的10条引物。这一体系的建立及多态性引物的筛选为以后利用ISSR分子标记技术进行暴马丁香的有关研究提供了科学依据。

暴马丁香；ISSR-PCR；单因子试验；正交设计；引物筛选