姚远^1,2* , 李崭^2* , 王亚杰² , 陆小花² , 张彤² , 甄兴厚² , 刘钊君² , 李瑞梅² , 刘姣² , 符少萍² , 胡新文¹ , 郭建春²

1海南大学热带作物学院,海口, 570228; 2中国热带农业科学院热带生物技术研究所,农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室,海口, 571101
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 24 篇   
收稿日期: 2020年03月16日    接受日期: 2020年03月25日    发表日期: 2020年08月20日

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木薯块根淀粉葡聚糖链结构是决定淀粉品质的关键因素，可溶性淀粉合成酶Ⅲ (SSⅢ)是调控植物支链淀粉葡聚糖长链合成的关键酶，木薯有两个MeSSⅢ的同源基因MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2。为了研究木薯MeSSⅢ对木薯块根淀粉品质形成的影响，根据MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 的保守区段，本研究构建了MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 的双基因编辑载体。利用在线软件 CRISPR-P v2.0同时设计靶标MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 的sgRNA，通过酶切连接构建重组 pCAMBIAP1301-Cas9-MeSSⅢ-gRNA质粒。将基因编辑载体转化农杆菌LBA4404后侵染木薯脆性胚性愈伤组织，筛选阳性脆性胚性愈伤组织，并提取其总 DNA。通过 PCR扩增靶点MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 的区段，并将扩增片段进行 Sanger测序，分析其编辑的靶标位点。结果发现MeSSⅢ-1 和MeSSⅢ-2 靶标位点被成功编辑，本研究有助于进一步获得MeSSⅢ基因突变体，以深入解析该基因在木薯淀粉合成通路中的作用。 

木薯(Manihot esculenta Crantz.)；淀粉合成酶,MeSS芋,；CRISPR