黄静依 , 孙双 , 张婷 , 李锐 , 兰利琼 , 卿人韦^*

四川大学生命科学学院, 生物资源与生态环境教育部重点实验室, 成都, 610065
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19卷, 第 1 篇   
收稿日期: 2020年03月02日    接受日期: 2020年03月06日    发表日期: 2021年08月08日

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F-box 蛋白是 SCF 复合体的重要组成元件之一，能通过泛素蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome system, UPS)参与调控胞内蛋白降解、受体识别、信号传导等生物学过程。为了探究一个 F-box like 蛋白在三角褐指藻细胞周期调控过程中的作用机制，本研究从三角褐指藻中克隆得到一个 F-box like 蛋白基因，构建原核表达载体 Tph-pET28a-F-box，将其转入大肠杆菌 BL21 (DE3)菌株中诱导表达，并对其诱导表达条件进行了优化，最后使用镍螯合亲和层析柱(Ni-NTA Agarose)对重组蛋白进行纯化并进行了生物信息学分析。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)检测。结果显示，导入大肠杆菌 BL21 (DE3)的三角褐指藻 F-box like 蛋白基因能够被诱导表达，重组可溶性蛋白最佳诱导条件为 16 ℃时，以浓度为 0.1 mmol/L 的异丙基 β-D- 硫代半乳糖苷(IPTG)诱导 12 h，纯化后的蛋白通过 Western blot 鉴定，显示在相对分子质量约为 72.75 kD 处出现一条与预期大小相符的蛋白印迹条带。生物信息学分析结果表明，该蛋白具有 F-box 蛋白的典型特征，位于膜外且不含有跨膜结构域，为亲水性蛋白，α- 螺旋和无规卷曲为三角褐指藻 F-box 蛋白二级结构的主要组成元件。本研究为进一步研究三角褐指藻 F-box like 蛋白的作用机制奠定了基础。

三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)；F-box like 蛋白；原核表达；蛋白纯化；蛋白质印迹法