张媛 , 黄芳 , 马燕林 , 马建忠^*

兰州理工大学生命科学与工程学院,兰州, 730050
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19卷, 第 21 篇   
收稿日期: 2020年02月07日    接受日期: 2020年02月14日    发表日期: 2021年06月02日

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为在植物细胞/原生质体中验证酵母单杂交系统解析的植物转录因子及其关键结构域，本研究构建了一套与酵母单杂交系统相匹配的植物瞬间表达分析系统，并在拟南芥叶片原生质体中进行了瞬间表达分析。结果显示，以AtDPBF4的转录激活区（CRII）构建的效应载体可在拟南芥原生质体中激活报告基因GUS的转录。这一结果与AtDPBF4的CRII在酵母细胞中的结果一致。报告载体中，含有6个UAS_Gal1的杂合启动子可引发下游报告基因GUS转录的酶活性达0.96 nmol 4-MU·mg^-1·min^-1；含有3个UAS_Gal1的杂合启动子可引发GUS基因的活性达0.73 nmol 4-MU·mg^-1·min^-1。含有6个UAS_Gal1的杂合启动子的强度明显强于含有3个UAS_Gal1的杂合启动子，但其活性并不是3个UAS_Gal1杂合启动子的2倍，仅比其活性高了31.5%。由此表明，在报告基因中增加 GAL4结合位点(UAS_Gal1)的重复序列可以提高下游报告基因的表达，但是这种活性升高趋势并不与 UASGal1的重复数量呈线性关系。

 

酵母单杂交系统；植物瞬时表达分析系统；载体构建