祁心 , 杨瑞 , 赵福宽 , 王建立 , 王绍辉 , 程继鸿

北京农学院植物科学技术学院, 北京市农业新技术重点实验室, 生物科学与工程学院, 北京, 102206
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13卷, 第 27 篇   doi: 10.13271/j.mpb.013.001867
收稿日期: 2014年01月04日    接受日期: 2014年03月06日    发表日期: 2015年07月07日

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推荐引用：

Qi X., Yang R., Zhao F.K., Wang J.L., Wang S.H., and Cheng J.H., 2015, Stem-Loop real time quantitative PCR for quantification of miRNA in tomato, Fenzi Zhiwu Yuzhong (Molecular Plant Breeding), 13(8): 1867-1871 (祁心, 杨瑞, 赵福宽, 王建立, 王绍辉, 程继鸿, 2015, 番茄miRNA的茎环qRT-PCR方法验证, 分子植物育种, 13(8): 1867-1871)

本研究采用SYBR Green染料的茎环qRT-PCR方法，以miR159和miR172为例，利用番茄叶片的总RNA作为模板，设计miRNA的茎环引物、特异上游引物、通用下游引物，使用茎环荧光定量PCR法定量检测miRNA表达量在番茄中的可行性。通过分析扩增曲线、熔解曲线，制作标准曲线，以及对PCR产物的克隆测序，结果表明该方法可以用于番茄miRNA的定量检测，并且具敏感性高、特异性好、操作简单、节约成本、模板用量少的优点。Trizol法和试剂盒法提取的总RNA在后续实验中几乎没有差异，但Trizol法更为经济，有效率。MiRNAs在植物的生长发育过程中起着重要的作用，本研究为番茄miRNA的深入研究奠定了基础。

miRNA；茎环qRT-PCR；定量检测；番茄