李欢 , 刘智 , 刘剑东 , 杭烨 , 张明生^*

贵州大学生命科学学院, 山地植物资源保护与种质创新教育部重点实验室, 贵阳, 550025
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《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19卷, 第 30 篇   
收稿日期: 2020年02月05日    接受日期: 2020年02月10日    发表日期: 2021年05月12日

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为获得同步化的人工种胚，以半夏疏松愈伤组织为试验材料，采用悬浮培养的方法，探讨温度、咖啡因、蔗糖浓度对半夏悬浮培养细胞分化形成人工种胚的同步化作用，为半夏人工种子制作提供同步化种胚。结果表明：以 MS 为基本培养基，添加 1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH 进行悬浮培养，温度为 8℃，处理 12 h，恢复 36 h，同步化效果最好，细胞分裂指数为 13.86%；咖啡因浓度为 2.00 mmol/L，处理 2 h，恢复 48 h，效果较好，细胞分裂指数为 9.42%；蔗糖浓度为 40 g/L，处理 5 d，恢复 4 d，效果一般，细胞分裂指数为 5.33%。分别先后继代 3 次于 MS+1.0 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH进行膨大培养及 MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L 6-BA+10 g/L sucrose+300 mg/L CH 进行分化培养。温度处理组微细胞团为 42.33 个，种胚分化率为 71.11%；咖啡因处理组微细胞团为 34.33 个，种胚分化率为 55.56%；蔗糖处理组微细胞团为 40 个，种胚分化率为 57.78%。因此，半夏悬浮培养细胞同步化形成人工种胚的适宜条件为：MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+30 g/L sucrose+300 mg/L CH，8 ℃处理 12 h，恢复 36 h，再转接进膨大及分化培养基继续培养。本研究为半夏人工种子生产提供技术参考。

半夏(Pinellia ternata (Thunb.) Breit)；悬浮培养；细胞同步化分化；细胞分裂指数；人工种胚