罗湘¹ , 朱玉静¹ , 彭滢枫¹ , 杨丹¹ , 谭勇^1,2* , 赵立春¹

1广西中医药大学药学院,南宁, 530200; 2广西中医药大学,广西壮瑶药重点实验室,南宁, 530200
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《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19卷, 第 25 篇   
收稿日期: 2020年01月17日    接受日期: 2020年01月24日    发表日期: 2021年04月12日

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为了获得适于龙珠果 ISSR-PCR的反应体系，本研究以龙珠果叶片为试验材料，提取基因组 DNA，采用 L₁₆(4⁵)正交设计试验，对影响龙珠果 ISSR-PCR扩增结果的 Mg²⁺浓度、dNTPs浓度、Taq DNA聚合酶用量、引物浓度和模板 DNA量进行优化，并筛选了最适退火温度。试验结果分析表明，各因素影响显著性为dNTPs浓度>Taq DNA聚合酶用量>Mg²⁺浓度>模板 DNA量>引物浓度。在 20μL反应体系中，dNTPs浓度0.2 mmol/L、Taq DNA聚合酶 0.5 U、Mg²⁺浓度 2.0 mmol/L、模板 DNA 25 ng、引物浓度 0.4μmol/L为最佳用量。实验从 100条 UBC引物中筛选得到 22条多态性较好的引物。本研究为龙珠果 ISSR标记开发、种质资源鉴定、遗传多样性分析和分子标记辅助选择育种等提供科学依据。

龙珠果；ISSR-PCR；体系优化；正交设计