兰艳平 , 刘东 , 赵岩 , 张丽 , 陈义 , 冯加加 , 渠云芳 ^* , 黄晋玲 ^*

山西农业大学农学院, 太谷, 030801
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 14 篇   
收稿日期: 2019年12月19日    接受日期: 2019年12月26日    发表日期: 2020年05月28日

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棉花组蛋白去泛素化酶 GhOTUD5 与生殖发育密切相关。为了获得大量可溶性表达的 GhOTUD5 蛋白，本试验对目的蛋白原核表达条件进行优化。采用分子克隆方法构建重组表达载体 pET-22b-GhOTUD5，转化大肠杆菌(Escherichia coli) BL21 (DE3)和 Transetta (DE3)，用异丙基 -β-D- 硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside, IPTG)诱导目的蛋白表达。在对影响原核表达的四个单因素(菌体密度 OD₆₀₀, 诱导剂 IPTG 终浓度, 诱导时间和诱导温度)分别分析的基础上，设计三水平的正交试验 L₉(4³)，摸索大量可溶性目的蛋白表达的最优条件。结果显示，目的蛋白 GhOTUD5 在 Transetta (DE3)中成功表达，在 BL21 (DE3)中不表达。在菌体密度 OD₆₀₀ 为 0.8、诱导温度为 28℃、IPTG 终浓度为 0.7 mmol/L、诱导 3 h 的条件下可溶性目的蛋白表达量最高，达到 13%左右。该研究结果为进一步研究 GhOTUD5 在棉花育性方面的功能提供了科学数据。
 

棉花；GhOTUD5 基因；原核表达；正交试验；条件优化