谭琳^1* , Azeem Farrukh² , 王南¹ , 葛宇¹

1 中国热带农业科学院海口实验站, 海口, 571101; 2 费萨拉巴德政府大学生物技术与生物信息系, 费萨拉巴德, 38000, 巴基斯坦
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 8 篇   
收稿日期: 2019年12月09日    接受日期: 2019年12月13日    发表日期: 2020年11月04日

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为了克服传统的基因电子克隆利用 EST 数据库需要反复比对与拼接而带来的繁琐，本研究利用SRA、TSA 等数据库，通过 BLAST 搜索同源序列，Serial cloner 软件寻找同源序列的开放阅读框架，CLUSTAW比对序列同源性等分析手段，建立了一种基因电子克隆的新方法。通过此方法，获得了芒果无色花青素还原酶(leucocyanidin reductase, LAR)基因的编码序列。根据此编码序列、设计引物，通过 RT-PCR 扩增，获得了长度为 1 062 bp 的芒果 LAR 基因序列，经双酶切、连接等方式，构建了含有 LAR 基因的重组植物表达载体pMAA-RedMilar。本研究结果将有助于进一步解析芒果 LAR 基因在原花青素生物合成中的作用，也为其他基因的电子克隆提供了新方法。

电子克隆；SRA；TSA；LAR cDNA