赵洪¹ , 张金兰¹ , 黄东益¹ , 夏薇¹ , 许云^2*

1海南大学热带作物学院,海口, 570228; 2海南大学生命科学与药学学院,海口, 570228
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 15 篇   
收稿日期: 2019年11月27日    接受日期: 2019年12月06日    发表日期: 2020年10月30日

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Da-dio5 基因是大薯(Dioscorea alata L.) Dioscorin蛋白合成途径中的关键基因。CRISPR/Cas9基因编辑系统早已广泛应用于各种作物的遗传育种。为了研究该基因在大薯块茎储藏蛋白形成过程中的作用机理，构建Da-dio5 基因的 CRISPR-Cas9敲除载体。本研究利用随机引物法、巢式 PCR、启动子库三种方法扩增 U3启动子，将 U3启动子与水稻(Oryza sativa L.) CRISPR/Cas9载体(pCAMBIA1301-PosU3gRNA-2NLScas9)相连接，构建大薯内源的 CRISPR/Cas9通用表达载体(pCAMBIA1301-DaU3pro-2NLS cas9+35T)，将Da-dio5 靶标序列与大薯通用表达载体相连构建大薯Da-dio5-CRISPR-Cas9基因敲除载体，采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法转化大薯，并成功得到的转基因阳性植株。
 

Da-dio5 基因；大薯(Dioscorea alata L.)；CRISPR-Cas9；表达载体；基因敲除