郭傲^1,2 , 高欢欢^1,2 , 陈默^1,2 , 郑雪莲^1,2 , 寇燕^1,2 , 郑国华^1,2*

1 福建农林大学园艺学院, 福州, 350002; 2 福建农林大学, 园艺产品贮运保鲜研究所, 福州, 350002
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 24 篇   
收稿日期: 2019年10月24日    接受日期: 2019年10月28日    发表日期: 2020年12月11日

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为建立稳定、可靠的无花果ISSR-PCR体系以及筛选出适用于该体系的ISSR引物，本研究以无花果为研究材料，采用正交设计试验与单因素试验相结合的方法，对影响ISSR-PCR反应的5个因素（Taq聚合酶、dNTPs、DNA模板、引物、Easy Taq Buffer（Mg²⁺））的工作浓度进行优化。在此基础上，从UBC公布的100条ISSR引物中筛选出16条扩增条带清晰、多态性好的引物，并筛选出其最佳退火温度。试验结果表明，5个因素对无花果ISSR-PCR反应均有极显著影响，影响程度大小依次为：Easy Taq Buffer（Mg²⁺）>引物> Taq聚合酶> DNA> dNTPs。最终确定的最佳反应体系为：反应总体积25μL，Taq聚合酶1.5U，dNTPs 0.16 mmol/L，DNA 30ng，引物0.3μmol/L，Easy Taq Buffer（Mg²⁺）3.5μL。研究结果为今后无花果ISSR标记开发、遗传多样性研究等提供了理论依据。

无花果(Ficus carica)； ISSR-PCR；反应体系； 正交试验；单因素试验