1 福建农林大学园艺学院, 福州, 350002; 2 福建农林大学, 园艺产品贮运保鲜研究所, 福州, 350002
作者
通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 24 篇
收稿日期: 2019年10月24日 接受日期: 2019年10月28日 发表日期: 2020年12月11日
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 24 篇
收稿日期: 2019年10月24日 接受日期: 2019年10月28日 发表日期: 2020年12月11日
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摘 要
为建立稳定、可靠的无花果ISSR-PCR体系以及筛选出适用于该体系的ISSR引物,本研究以无花果为研究材料,采用正交设计试验与单因素试验相结合的方法,对影响ISSR-PCR反应的5个因素(Taq聚合酶、dNTPs、DNA模板、引物、Easy Taq Buffer(Mg2+))的工作浓度进行优化。在此基础上,从UBC公布的100条ISSR引物中筛选出16条扩增条带清晰、多态性好的引物,并筛选出其最佳退火温度。试验结果表明,5个因素对无花果ISSR-PCR反应均有极显著影响,影响程度大小依次为:Easy Taq Buffer(Mg2+)>引物> Taq聚合酶> DNA> dNTPs。最终确定的最佳反应体系为:反应总体积25μL,Taq聚合酶1.5U,dNTPs 0.16 mmol/L,DNA 30ng,引物0.3μmol/L,Easy Taq Buffer(Mg2+)3.5μL。研究结果为今后无花果ISSR标记开发、遗传多样性研究等提供了理论依据。
关键词
无花果(Ficus carica); ISSR-PCR;反应体系; 正交试验;单因素试验