张斌^1,2* , 张启军^2* , 廖慧敏^1,2 , 秦海龙^1,2 , 宗寿余² , 夏士健² , 吕川根²

1 南京农业大学农学院, 南京, 210095;
2 江苏省农业科学院粮食作物研究所, 南京, 210014
*同等贡献作者
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2015 年, 第 13卷, 第 27 篇   doi: 10.13271/j.mpb.013.000205
收稿日期: 2014年01月16日    接受日期: 2014年07月30日    发表日期: 2014年08月30日

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磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(phosphoenolpyruvate carboxylase, PEPCase)是高等植物尤其是C₄植物进行光合作用的一种关键酶，利用PEPC基因提高C₃植物的光合效率具有重要的应用前景。本研究利用来源于玉米PEPCase免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合，经筛选克隆，得到3株能稳定分泌抗PEPCase的单克隆抗体杂交瘤细胞，并制备腹水型单抗。利用其中一株杂交瘤细胞4E5的小鼠腹水单抗和PEPCase的兔源多抗，建立检测PEPCase的多抗一待检样品一单抗模式的双夹心酶联免疫吸附检测方法(enzyme linked immuno sorbent assay, ELISA)。检测条件经过优化后分别为：兔源多抗以1:3 200稀释，单抗4E5以1:800稀释，整个操作过程仅需要5个小时(不含包被和封闭时间)，本方法能够长期保存。利用建立的双夹心ELISA检测方法检测验证转玉米PEPC基因水稻，在经PCR分子检测后证实携带PEPC基因的305株样品中，有237株为阳性单株，阳性率为77.7%，符合率较高。实验表明，本研究能够为育种上快速筛选转PEPC基因作物提供了一种更加简单、快速、灵敏的检测方法。

C₄植物；PEPCase；单克隆抗体；双夹心酶联免疫吸附试验