于月华 , 郑崇珂 , 倪志勇

1 新疆农业大学农学院, 乌鲁木齐, 830052; 2 山东省农业科学院山东省水稻研究所, 济南, 250100
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19卷, 第 17 篇   
收稿日期: 2019年09月30日    接受日期: 2019年10月04日    发表日期: 2021年03月14日

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为了获得 TaSIM (Salinity-induced R2R3-MYB)基因的纯化蛋白，以便研究 TaSIM 转录因子的 DNA结合特异性。本研究以含有 pET28a-TaSIM 原核表达载体的大肠杆菌 BL21 为材料，用 0.5 mmol/L IPTG，在37 ℃诱导 TaSIM 融合蛋白表达 2 h，收集上清液，采用 Ni-NTA 柱纯化含有 His 标签的 TaSIM 融合蛋白，SDS-PAGE 电泳检测结果表明获得了分子量大小约为 33 kD 的 TaSIM 融合蛋白。采用 Western blotting 检测TaSIM 融合蛋白的表达，以鼠抗血清和辣根过氧化酶标记的山羊抗小鼠 IgG 为抗体，结果表明 TaSIM 融合蛋白能够和抗体特异结合，说明诱导的蛋白是 TaSIM 融合蛋白。研究结果为进一步利用凝胶阻滞方法检验TaSIM 蛋白与顺式作用元件的结合提供实验基础。
 

小麦(Triticum aestivum)； TaSIM； 蛋白纯化； Western 杂交