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《分子植物育种》印刷版, 2014 年, 第 12卷, 第 20 篇 doi: 10.13271/j.mpb.012.000554
收稿日期: 2014年01月10日 接受日期: 2014年02月17日 发表日期: 2014年03月05日
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Liu J., Jiang J.Y., and Xu J.C., 2014, An Improved Method for the Extraction of Total RNA from Spruce Needles, Fenzi Zhiwu Yuzhong (Molecular Plant Breeding), 12(3): 554-561 (刘洁, 江静怡, 徐吉臣, 2014, 一种改良的云杉针叶总RNA 提取方法, 12(3): 554-561)
云杉(Picea)是一种重要的绿化和用材树种。根据云杉的特点,本研究提出了改良的云杉RNA 提取方法即SDS 酚-LiCl 法,以不同种云杉(青杄, 白杄和红皮)的针叶为试验材料,采用TRIzol 法、CTAB 法、改进的SDS 酚法和SDS 酚-LiCl 法提取RNA,并进行了质量验证。结果表明:TRIzol 法不能提取云杉针叶总RNA;CTAB 法和改进的SDS 酚法提取的RNA 质量少,并存在不同程度的多糖、多酚和DNA 污染。SDS 酚-LiCl法适当增加了提取液中SDS、PVP 以及茁- 巯基乙醇的浓度,结合酸性条件、高盐溶液(3 mol/L NaAc)和LiCl等减少DNA、多糖污染的步骤,最终提取的RNA 质量好、得率高。进一步反转录后,利用特异引物进行扩增验证,发现扩增的片段条带清晰,得率高,片段大小符合预期。研究结果表明,SDS 酚-LiCl 法可以较好的提取云杉RNA 并进行后续的基因表达及转录组研究,为推动云杉在转录水平上的研究奠定了基础。