马一鸣 , 周杨开 , 朱鹏翔 , 车燕萍 , 纪兆林 , 朱峰 ^*

扬州大学园艺与植物保护学院,扬州, 225009
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 6 篇   
收稿日期: 2019年07月17日    接受日期: 2019年07月09日    发表日期: 2020年07月30日

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α- 苦瓜素是一种典型的Ⅰ型核糖体失活蛋白，具有多种生物活性，有着广泛的应用前景。本研究通过原核表达技术成功获得α- 苦瓜素蛋白及制备了血清抗体。首先通过 RT-PCR方法从苦瓜籽中克隆到琢-苦瓜素全长基因，然后将该基因连接至原核表达载体 pET-28a(+)上，导入大肠杆菌 Rosetta菌株中并少量诱导表达，筛选出重组蛋白的最适表达条件。在 37℃、终浓度 1 mmol/L IPTG的诱导条件下，可成功诱导出分子量约为 29.7 kD左右的可溶性重组蛋白，与预期α-苦瓜素大小一致。按照最适条件进行大量诱导琢- 苦瓜素蛋白的表达，利用 Ni-NTA柱对α-苦瓜素重组蛋白进行纯化，最后以纯化的α-苦瓜素蛋白免疫注射新西兰大白兔制备抗血清。Western blotting分析表明，制备的抗血清具有较好的特异性和灵敏度，可以特异性检测苦瓜籽中的α-苦瓜素蛋白。本研究结果为下一步探究琢- 苦瓜素调控植物防御生物胁迫的分子机理提供指导
 

α- 苦瓜素；原核表达；抗血清