郭毓^1* , 卢静洁^1* , 黄康¹ , 张梦迪¹ , 王兴¹ , 李晓彦¹ , 包希吉乐² , 赵永秀¹ , 阿拉坦其其格^1**

1 内蒙古大学生命科学学院, 呼和浩特, 010070; 2 北京林业大学生命科学与技术学院, 北京, 100083
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 32 篇   
收稿日期: 2019年06月20日    接受日期: 2019年06月28日    发表日期: 2020年09月23日

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本研究以内蒙古自治区境内 8 个自然居群野生华北蓝盆花叶片作为供试材料，进行基因组总 DNA的提取检测、ISSR 引物筛选和引物退火温度的筛选。针对华北蓝盆花 ISSR-PCR 反应中的模板 DNA 浓度和引物浓度 2 个影响因素，在 4 个水平上对华北蓝盆花 ISSR-PCR 反应体系进行优化，确定最佳反应水平，最终建立华北蓝盆花 ISSR-PCR 扩增的最佳反应体系。结果筛选出了 8 条多态性较好的华北蓝盆花 ISSR 引物及其退火温度，平均每条 ISSR 引物扩增出 12.3 条带，多态性条带占 93.88%；华北蓝盆花 ISSR-PCR 反应的最佳体系为总体积 20 μL，DNA 模板 1 μL，DNA 模板浓度为 60 ng/μL，引物 0.6 μL，引物浓度为 0.8 μmol/L，Ex Taq DNA 聚合酶 10 μL，ddH₂O 8.4 μL，扩增程序为 94℃预变性 5 min；94℃变性 0.5 min，不同引物最佳退火温度下退火 1 min，72℃延伸 1.5 min，35 个循环；循环结束后 72℃继续延伸 7 min；4℃保存。本研究结果为进一步研究华北蓝盆花居群遗传多样性提供科学依据。
 

华北蓝盆花；ISSR-PCR；反应体系；引物筛选