唐雨晨 , 岳鑫 , 张屏^* , 程杰 , 包保全^*

内蒙古医科大学药学院, 呼和浩特, 010110
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 26 篇   
收稿日期: 2019年06月13日    接受日期: 2019年06月20日    发表日期: 2020年08月27日

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以藜芦为试验材料，通过 L₁₆(4⁵)正交试验与单因素实验两种方法对藜芦 ISSR-PCR 反应体系中的5个主要因素(模板 DNA, 引物, Taq DNA 聚合酶, dNTPs, Mg²⁺)进行筛选与优化，建立藜芦 ISSR-PCR 最佳反应体系；在此优化体系下，从 100 条引物中筛选适宜的 ISSR 引物，设置温度梯度检测各引物最佳退火温度。结果表明，藜芦 20 μL ISSR-PCR 反应体系包括：0.30 μmol/L 引物、24 ng/20 μL 模板 DNA、2 U/20 μL Taq DNA 聚合酶、0.20 mmol/L dNTP、1.00 mmol/L Mg²⁺；从 100 条引物中筛选出 16 条扩增稳定、多态性丰富的 ISSR 引物。利用 14 份藜芦样品验证该优化体系的稳定性，证明该体系稳定可靠，可为后续藜芦的遗传多样性分析研究提供帮助。
 

藜芦(Veratrum nigrum L.)；ISSR-PCR；正交试验；单因素实验；体系优化