青海大学,高原花卉研究中心,青海省园林植物与观赏园艺重点实验室,西宁, 810016
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 21 篇
收稿日期: 2019年04月25日 接受日期: 2019年05月27日 发表日期: 2020年06月22日
作者 通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 21 篇
收稿日期: 2019年04月25日 接受日期: 2019年05月27日 发表日期: 2020年06月22日
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摘 要
为建立郁金香 SSR-PCR反应体系,本研究以 36个荷兰引进的郁金香栽培品种和 5个产于中国新
疆的野生种为试验材料,采用单因素试验和 L16(45
)正交设计相结合的方法,对影响郁金香 SSR-PCR 反应的
Mg2+
浓度、 dNTPs浓度、 引物浓度、模板 DNA、 Taq 酶用量进行优化,建立最佳的 SSR-PCR 反应体系,并利用
3对引物在 41 份郁金香材料中验证反应体系的稳定性。结果表明:在 20 滋L的 PCR 反应体系中, 10伊PCR
Buffer (Mg2+
free) 2 滋L、 Mg2+
2.0 mmol/L、 dNTPs 0.75 mmol/L、引物 2.0 滋mol/L、模板 DNA 10 ng、 Taq 酶 0.15 U
为最优体系;通过正交试验确定 5个因子对 SSR-PCR体系的影响程度为:模板 DNA>Taq 酶>引物>Mg2+
>
dNTPs。筛选出的 3对引物在 41份郁金香材料中均可扩增出目的条带,表明该体系的稳定性好。本研究建立
SSR-PCR反应体系,为郁金香 SSR标记的开发以及遗传多样性分析、品种指纹图谱构建、种质资源鉴定等方
面提供了帮助。
关键词
郁金香栽培品种;郁金香野生种;简单重复序列;单因素试验;正交试验