范亚军^* , 赵轩 , 刘琼馨 , 盛晓珏

长春师范大学生命科学学院, 长春, 130024
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17卷, 第 14 篇   
收稿日期: 2019年04月09日    接受日期: 2019年04月16日    发表日期: 2020年02月16日

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PA1b 是一种来源于豌豆种子的生物活性多肽，具有非常重要的生物杀虫活性，本研究以豌豆幼苗为材料，利用 RT-PCR 技术克隆抗虫基因 PA1b，通过酶切连接技术构建了适用于豌豆植物的瞬时表达载体pCAPE2-PA1b，转化农杆菌 GV3101 后，利用真空侵染技术将含有 PA1b及报告基因 GFP 的农杆菌分别接种发芽的豌豆种子，在 0.08 MPa 真空条件下侵染 3~5 min 后播种豌豆种子，预期在豌豆幼苗中瞬时表达抗虫蛋白 PA1b，幼苗出土后利用手提式紫外灯跟踪观察，在报告基因 GFP 表达高峰期(幼苗出土后 5~7 d)提取豌豆幼苗可溶性总蛋白，利用 His 标签抗体检测豌豆抗虫基因 PA1b 的表达，实验结果表明抗虫基因PA1b 在豌
豆幼苗中成功表达，为进一步分析 PA1b 抗虫机制提供基础。

抗虫蛋白 PA1b； 豌豆；瞬时真空侵染；蛋白杂交