吴春燕 , 陈赫楠 , 李静 , 宋廷宇

吉林农业大学园艺学院, 长春, 130118
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2013 年, 第 11卷, 第 25 篇   doi: 10.3969/mpb.011.000838
收稿日期: 2013年09月26日    接受日期: 2013年10月22日    发表日期: 2013年10月29日

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为获得适于胡萝卜ISSR-PCR的反应体系，本研究以胡萝卜为试验材料，采用新型植物基因组DNA提取试剂盒提取胡萝卜嫩叶DNA，利用正交试验设计方法，对ISSR-PCR的5个影响因素：Mg²⁺、dNTP、Taq DNA聚合酶、引物和模板DNA进行了研究。结果得到胡萝卜ISSR-PCR的最佳反应体系：25 μL的反应体系中含有1.5 mmol/L Mg²⁺、0.15 mmol/L dNTP、1.5 U Taq DNA聚合酶、0.2 μmol/L引物、50 ng模板DNA。利用优化的反应体系，对最佳反应次数进行了筛选，结果表明优化的反应体系适宜的循环次数是35次。该体系可以为胡萝卜遗传多样性分析、基因定位等提供理论依据。

胡萝卜；正交设计；ISSR；PCR反应体系