潘龙玉^1,2* , 李军^2* , 王歆^2* , 刘中来² , 赵建华² , 刘雄伦³ , 戴良英³ , 毛雪琴⁴ , 瞿绍洪^2**

1 浙江师范大学化学与生命科学学院, 金华, 321004; 2 浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所, 杭州, 310021; 3 湖南农业大学, 作物种质创新与资源利用省重点实验室, 长沙, 410128; 4 浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所, 杭州, 310021
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 12 篇   
收稿日期: 2019年01月29日    接受日期: 2019年02月28日    发表日期: 2020年04月30日

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水稻稻瘟病是由子囊菌(Magnaporthe oryzae)引起的水稻灾害性病害。培育抗病品种是防治稻瘟病最经济有效的措施之一。水稻 Pi9 抗稻瘟病基因来源于小粒野生稻并已被克隆和应用于转基因育种。为了提高无选择标记转基因植株的选择效率，将绿色荧光蛋白(GFP)用作可视遗传标记，对双菌株共转化系统进行改良：目的基因载体携带 Pi9 抗稻瘟病基因；标记基因载体用潮霉素磷酸转移酶(HPT)作为植物转化选择标记，用 GFP 作为负选择标记，筛除标记基因分离植株。两种载体的农杆菌转化株混合，分别与水稻品种‘浙恢414’、‘浙粳 22’、‘浙 11B’、‘日本晴’、‘空育 131’和‘粤泰 B’的愈伤组织共培养，然后从 5%~38.3%的起始愈伤组织筛选获得了转化愈伤组织(HPT+GFP+)。对 T0 植株进行 Pi9 基因 PCR 检测，11.8%~77.8%的 T0 植株为共转化植株(HPT+GFP+Pi9+)。对共转化植株 T1 代进行绿色荧光检测，筛选阴性植株(GFP-)，再通过 PCR 筛选 Pi9+ 植株。根据 13 个 T1 群体的研究结果，61%的共转化植株在 T1 代分离出无选择标记转基因植株(HPT-GFP-Pi9+)。转 Pi9 的无选择标记植株和后代株系对水稻稻瘟病呈抗病反应。因此，本研究通过 GFP 标记提高了双菌株共转化系统的选择效率，转 Pi9 的无选择标记水稻株系为水稻抗稻瘟病育种提供了有用的遗传资源。

水稻(Oryza sativa)；共转化；稻瘟病(Magnaporthe oryzae)；转基因植物；选择标记