张丽芳^1* , 赵兴能 ⁴ , 马美¹ , 施晓东¹ , 胡海林³ , 陈海如⁴ , 莫笑晗 ²

1 曲靖师范学院生物资源与食品工程学院, 曲靖, 655011; 2 云南省烟草农业科学研究院, 昆明, 650021; 3 曲靖市农业科学院, 曲靖, 655011; 4云南农业大学植物保护学院, 昆明, 650201
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 27 篇   
收稿日期: 2018年12月30日    接受日期: 2019年01月07日    发表日期: 2020年05月19日

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烟草丛顶病由烟草丛顶病毒、烟草脉扭病毒、烟草脉扭病毒伴随 RNA 和烟草丛顶病卫星 RNA 复合侵染引起的毁灭性病害，为了构建这四种病毒的干扰载体，培育抗病毒烟苗，本研究首先利用 PCR 扩增、酶切、克隆、连接转化和胶纯化技术分别得到携带酶切序列约 200 bp 的四种病毒目的片段；其次，用目的片段与携带有对应酶切序列的 pENTR^TM2B 入门载体连接、检测和纯化得到携带有目的片段的入门重组载体 pENTR^TM 2B-Virus；最后，用入门重组载体与表达载体 PK7GW1GW2 进行 LR 反应，经 PCR 检测得到正确干扰重组载体后，再用叶盘法将目的基因转入烟草叶片中，进一步用组培技术培育组培苗。本研究为解决目前烟草丛顶病防治难题，提供烟草生产发展技术思路和理论依据。
 

烟草丛顶病；RNA 干扰； Gateway 重组技术；叶盘法