万如意 , 丛云寒 , 姜珊珊 , 金朝霞^*

大连工业大学生物工程学院, 大连, 116034
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 22 篇   
收稿日期: 2018年12月27日    接受日期: 2020年01月09日    发表日期: 2020年02月17日

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喜树是一种具有药用价值的木本植物，其主要次级代谢产物喜树碱具有良好的抗癌功效。本研究主要通过病毒诱导的基因沉默(virus induced gene silencing, VIGS)技术对喜树碱生物合成途径中的关键酶基因CaCYC1 环烯醚萜合酶(Camptotheca acuminata iridoid synthase, CaCYC1)进行瞬时沉默，进而研究该基因对喜树碱生物合成的影响。以喜树叶片总 RNA 为模板，通过 RT-PCR 技术克隆 CaCYC1 基因片段并构建TRV-VIGS 重组质粒，转化农杆菌 GV3101 后侵染喜树叶片，培养 20 d 后利用 qRT-PCR 与 HPLC 技术分析沉默对 CaCYC1 基因转录水平及喜树碱合成的影响。结果表明：与对照组相比，实验组中 CaCYC1 基因的相对表达量显著下降 49%，叶片中喜树碱的积累量显著下降 35%。上述结果表明，本研究所构建的由 TRV 介导的 VIGS 体系可有效沉默内源基因的表达，CaCYC1 基因可正向调控喜树叶片中喜树碱的生物合成。

喜树(Camptotheca acuminata Decne)； 喜树碱；病毒诱导的基因沉默； 瞬时沉默；环烯醚萜合酶