王文文 , 孙红正 , 李俊周 , 彭廷 , 杜彦修 , 张静^* , 赵全志^*

河南农业大学农学院, 河南粮食作物协同创新中心, 河南省水稻生物学重点实验室, 郑州, 450002
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17卷, 第 16 篇   
收稿日期: 2018年10月29日    接受日期: 2018年11月20日

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为研究 miR395 调控水稻硫吸收和同化的分子机制，我们通过生物信息学的分析方法，设计了水稻miR395d 基因的前体序列，将其连接到 pHB 载体上，从而构建了 miR395d 的过表达载体，随后通过农杆菌介导法转化水稻品种日本晴，获得 10 组转基因株系。采用潮霉素抗性筛选鉴定阳性转基因植株，在潮霉素溶液中能正常生长的为阳性植株，反之则为假阳性植株，并利用 qRT-PCR 的方法验证 miR395d 的表达量。结果表明，阳性转基因株系 OE-2、OE-3 和 OE-4 中 miR395d 基因表达量显著升高，说明 miR395d 的过表达载体构建成功。初步分析 miR395d 过表达植株的功能发现，在缺硫的水平下，与日本晴相比，miR395d 过表达水稻植株叶片出现萎黄、植物生物量显著降低、根长显著变短等表型，其生长发育受到抑制。由于硫是植物生长所需营养元素之一，对植物生长发育及作物产量和品质均存在重要影响。miR395d 过表达水稻株系的构建，为后续进一步研究 miR395 在水稻硫吸收和同化路径中的作用提供了材料。

水稻(Oryza sativa)；miR395d；基因表达；载体构建