何佳悦^1,2 , 王莉² , 贾翠蓉² , 朱显亮² , 王亚琴² , 翁启杰² , 周长品^1,2 , 甘四明^1,2 , 李发根^1,2*

1中国林业科学研究院,林木遗传育种国家重点实验室,北京, 100093; 2中国林业科学研究院热带林业研究所,热带林业研究国家林业局重点实验室,广州, 510520
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 32 篇   
收稿日期: 2018年10月18日    接受日期: 2018年10月25日    发表日期: 2020年05月27日

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随着林木功能基因组学的发展，如何快速高效地提取高质量的核酸变得越来越重要。本研究基于 Kingfisher Flex 全自动磁珠提取纯化系统，以细叶桉叶片为材料，利用 5 种磁珠法 RNA 提取试剂盒(A/B/C/D/E)比较提取 RNA 的质量和纯度，筛选出试剂盒 C 为最佳试剂盒。在试剂盒 C 默认提取程序基础上，利用正交设计 L₉(34)，研究 Kingfisher Flex 全自动磁珠提取纯化系统上不同洗涤速度、洗脱速度及时间等机器参数对提取 RNA 的浓度和纯度的影响。正交试验结果表明，对提取 RNA 的浓度和纯度影响最大的机器参数是洗涤速度，正交试验最优程序组合下提取 RNA 的纯度稍优于试剂盒 C，但是得率仅为试剂盒 C的 1/3，综合比较后确认试剂盒 C 默认程序为提取细叶桉叶片 RNA 的最优提取程序。另外利用试剂盒 C 也分别对降香黄檀、大果紫檀、油楠、檀香、黑木相思和柚木这六个树种的叶片 RNA 进行提取，结果表明提取出的 RNA 均满足 cDNA 建库以及转录组测序实验的要求。本研究建立了 Kingfisher Flex 全自动磁珠提取纯化系统上树木叶片 RNA 的高效提取方法，对树木叶片高通量 RNA 提取有重要的应用价值，并为其他树种在提取 RNA 程序上对相关参数进行优化和设置提供了参考。
 

Kingfisher Flex系统；树木叶片；RNA提取；磁珠法 RNA提取试剂盒