潘春柳¹ , 姚绍嫦 ^2* , 黄燕芬¹ , 唐美琼¹ , 朱艳霞¹ , 董青松¹ , 余丽莹¹

1 广西壮族自治区药用植物园, 广西药用资源保护与遗传改良重点实验室, 南宁, 530023; 2 广西中医药大学, 海洋药物研究院, 南宁, 530001
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《分子植物育种》印刷版, 2020 年, 第 18卷, 第 17 篇   
收稿日期: 2018年10月15日    接受日期: 2018年10月22日    发表日期: 2020年05月18日

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9- 顺式环氧类胡萝卜素双加氧酶(9-cis-epoxycarotenoid dioxygenase, NCED)是 ABA 生物合成的限速酶。诸多研究表明 NCED 基因表达量的变化与 ABA 含量显著相关，在种子休眠过程中发挥重要作用。为探究草果 AtNCED 基因的序列特征和功能，本研究以草果(Amomum tsaoko Crevost et Lemarie)种子转录组为基础，采用 RT-PCR 技术克隆了一个 AtNCED 基因。该基因全长 2 372 bp，包含一个 1 830 bp 的开放阅读框(open reading frame, ORF)，编码 610 个氨基酸。生物信息学分析显示，AtNCED 基因编码的蛋白在 N- 末端包含典型的叶绿体转运肽序列，在催化结构域含有 4 个高度保守的组氨酸残基。AtNCED 蛋白与芭蕉科马来西亚蕉同源性较高，与其他单子叶植物处在同一进化分支。实时荧光定量 PCR 分析结果表明，AtNCED 基因表达量随着层积时间的增加逐渐下降，该基因可能正向调控种子休眠，在草果种子休眠诱导与维持中发挥重要作用。进一步地，利用同源重组方法，成功构建了 pBI121-AtNCED 过表达载体，并转化至农杆菌 EHA105。该研究结果为弄清 ABA 激素信号在种子休眠中的调控作用提供了帮助。

草果；AtNCED 基因；克隆；表达载体构建