王金彪¹ , 何星辉¹ , 高谢旺² , 覃诗琪² , 邓淞月² , 刘春林² , 阮颖^1*

1 湖南农业大学生物科学技术学院, 长沙, 410128; 2 湖南农业大学农学院, 长沙, 410128
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《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17卷, 第 13 篇   
收稿日期: 2018年10月10日    接受日期: 2018年10月17日

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分泌信号肽是生物体内的一类重要功能分子。通过生物信息学分析，揭示甘蓝型油菜 BnaLCR78 基因编码一个由 78 个氨基酸组成、N 端包含分泌信号肽且 C 端富含半胱氨酸的蛋白，属于富含半胱氨酸的分泌信号肽。为进一步研究该基因的功能，借助农杆菌介导的甘蓝型油菜下胚轴遗传转化方法，利用 CRISPR/Cas9 系统对甘蓝型油菜 BnaLCR78 基因进行编辑，实现定向敲除。本实验共计使用 1 200 个外植体，经除草剂草铵膦的抗性筛选及对 213 株抗性苗基因组 DNA 的 PCR 检测，获得了 26 株转基因油菜，转化率约为2.17％，但在 T0 代并未获得发生了目标基因被编辑的植株。幸运地是从 T0 自交获得的 T1 植株中获得基因被
编辑了的植株。通过扩增 T1 代 27 株转基因油菜靶位点并测序，发现有 1 株在靶位点 2 有一个 T 碱基的插入，其基因型为 +1/WT 的杂合突变体，说明在 T1 植株中，基因的编辑效率达到了 3.7%。这对后续研究甘蓝型油菜 BnaLCR78 基因功能的研究提供了帮助。

甘蓝型油菜；分泌信号肽；BnaLCR78 基因； 生物信息学； 基因编辑