王周霞 ¹ , 罗红玉¹ , 张欢欢¹ , 朱熙^1,2 , 刘雪¹ , 李世贵¹ , 王树林¹ , 杨江伟^1,2* , 张宁^2* , 司怀军^1,2

1 甘肃农业大学生命科学技术学院, 兰州, 730070; 2 甘肃农业大学, 甘肃省作物遗传改良与种质创新重点实验室, 甘肃省干旱生境作物学省部共建国家重点实验室培育基地, 兰州, 730070
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《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17卷, 第 21 篇   
收稿日期: 2018年08月24日    接受日期: 2018年09月09日    发表日期: 2019年08月27日

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Microcosmic (miRNAs)是一类具有调控功能的内源性单链非编码小分子 RNA，通过在转录后水平与靶基因互补结合来调控靶基因的表达。海藻糖是一种广泛存在于植物体内的渗透调节性物质，其在植物响应干旱胁迫中发挥着非常重要的作用。本研究利用人工 miRNA 技术(artificial microRNA, amiRNA)设计特异性沉默马铃薯海藻糖基因(StTRE)的人工 miRNA (amiR-StTRE)，并利用巢式 PCR 技术克隆得到包含 amiRTRE 前体序列的 701 bp 目的片段。然后将获得的 DNA 片段(701 bp)与表达载体 pCPB121 通过双酶切和质粒重组法构建 StTRE 基因 amiRNA 表达载体(pCPB121-amiR-StTRE)，并经过双酶切图谱分析和测序检测，成功构建了表达载体 pCPB121-amiR-StTRE。以期有目的地利用 amiRNA 进行马铃薯的抗旱性遗传改良提供分子理论依据。

马铃薯(Solanum tuberosum L.)；海藻糖酶基因；人工microRNA 技术；干旱胁迫