王芳¹ , 陈巧红¹ , 董乐^1* , 王云² , 朱国立³ , 许珊珊¹ , 黄苹苹¹ , 王建颖¹ , 林娟¹

1 泉州师范学院海洋与食品学院, 泉州, 362000; 2 内蒙古民族大学农学院, 通辽, 028042; 3 内蒙古通辽市农业科学院, 通辽, 028015
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2018 年, 第 16卷, 第 6 篇   
收稿日期: 2018年08月23日    接受日期: 2018年09月05日    发表日期: 2019年01月16日

这是一篇采用Creative Commons Attribution License进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许和同意第三方无条件的使用与传播。

为探讨蓖麻(Ricinus communis L.) 3- 磷酸甘油醛脱氢酶(G1yceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)基因(RcGAPDH)作为内参基因进行相关研究的可行性，从转录和翻译水平研究其组织表达谱。本研究以蓖麻雌性花为材料，扩增 RcGAPDH (GenBank 登录号: XM_002523449)的开放阅读框序列，并将其亚克隆至原核表达载体 pET32a(+)。酶切、测序结果表明，重组载体 pET32a(+)-RcGAPDH 构建成功。将pET32a(+)-RcGAPDH 转化到大肠杆菌表达菌株 BL21(DE3)中进行优化表达，表达蛋白经纯化后进行 Western blotting 验证，结果表明，IPTG 可诱导一个分子量约 62 kD 的特异蛋白，且主要以包涵体的形式存在，优化表达条件为：0.5 mmol/L IPTG、28℃、200 r/min 和诱导表达 6 h。用表达蛋白作为抗原，免疫新西兰白兔制备抗 RcGAPDH 的多克隆抗血清，用制备的多克隆抗血清进行 Western blotting 的结果表明，该多克隆抗血清具针对 RcGAPDH 的特异性，经 ELISA 检测，其效价为 1颐204 800。通过实时荧光定量 RT-PCR (RT-qPCR)检测蓖麻 RcGAPDH mRNA 在时空一致的条件下的正常生长的根、茎、叶、雌花、雄花和果实中的表达；同时，制备多种组织匀浆蛋白，使用多克隆抗血清进行 Western blotting 分析，结果表明，蓖麻各组织中 RcGAPDH 转录水平的表达存在显著差异，RcGAPDH 在雌花和雄花中的含量显著高于其他组织中的，但翻译水平的表达差异不显著，可做为在翻译水平研究蓖麻植株中其他基因表达的内参标准。

蓖麻；3- 磷酸甘油醛脱氢酶；原核表达；多克隆抗血清；组织表达