王元元^1,2* , 刘姣^2* , 蔡肖¹ , 符少萍² , 李瑞梅² , 姚远² , 胡新文^1** , 郭建春^2**

1 海南大学热带农林学院, 海口, 570228; 2 中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室, 海 口, 571101
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17卷, 第 7 篇   
收稿日期: 2018年08月06日    接受日期: 2018年09月17日    发表日期: 2019年03月27日

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AT-hook 是一类含有 AT-hook 基序的核定位蛋白，被命名为 AHL 蛋白(AT-hook nuclear localizedproteins)，在植物生长发育、器官建成以及对激素信号和逆境胁迫响应中起重要作用。本研究通过 RT-PCR克隆获得木薯 MeAHL31 基因，全长为 1 189 bp，其中开放阅读框(ORF)为 1 014 bp，编码 337 个氨基酸，蛋白质分子量为 35.69 kD，理论等电点为 5.55，GRAVY 为 -0.74，是一个不稳定的亲水性蛋白，在 128~264 aa 区间存在一个 AT-hook 蛋白的保守结构域 PPC domain，属于 AT-hook 蛋白家族。我们分别将全长 MeAHL31(1~1 014)和 MeAHL31 (370~742)基因片段构建到 pET28a 原核表达载体和含麦芽糖结合蛋白(maltosebinding protein, MBP)标签的 pET28a-MBP 载体上，并转化至 E. coli BL21 (DE3)中进行诱导表达和表达条件优化。结果表明，最佳诱导表达条件是 OD600=0.6，IPTG 浓度为 1.0 mmol/L，15℃培养 16 h；含 MBP 融合伴侣的 pET28a-MBP 载体更有利于 MeAHL31 蛋白的可溶性表达；在同种载体中预测可溶性高的 MeAHL31(370~742)区段序列较 MeAHL31 (1~1 014)全长基因的可溶性蛋白表达水平更高。本研究优化高效诱导表达条件获得 MeAHL31 融合蛋白，为探究 MeAHL31 基因的生物学功能提供理论依据。

木薯；AT-hook；基因克隆；原核表达；条件优化