杜乐山 , 谷思 , 张盾 , 任梦云 , 臧春鑫 , 关潇

中国环境科学研究院, 国家环境保护区域生态过程与功能评估重点实验室, 北京, 100012
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17卷, 第 24 篇   
收稿日期: 2018年07月25日    接受日期: 2018年09月03日    发表日期: 2019年10月17日

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为建立椭圆叶花锚 ISSR-PCR 最佳反应体系，本研究采用正交设计和单因素试验的方法，对影响ISSR-PCR 反应体系的 5 种关键因素(DNA, dNTPs, 引物, Mg2+, Taq DNA 酶)进行最适浓度筛选，并采用甘肃省的 3 个居群进行验证。结果表明，各因素影响大小依次为：DNA 浓度> Mg2+>dNTPs> Taq DNA 酶>引物浓度。椭圆叶花锚 ISSR-PCR 反应的最佳体系为(25 滋L)：50 ng DNA 模板，Mg2+ 2.0 mmol/L，dNTPs 0.20 mmol/L，Taq 酶 1.5 U，引物 0.4 滋mol/L，2.5 滋L 10伊Buffer。选取甘肃省 3 个居群进行验证，结果显示扩增条带清晰明亮且重复性好，表明该反应体系适用于椭圆叶花锚的 ISSR 分子标记。该反应体系的建立可为椭圆叶花锚ISSR 标记开发、遗传多样性、遗传图谱构建等后续分析提供参考。

椭圆叶花锚(Halenia elliptica)；ISSR-PCR；正交试验；单因素试验；体系优化