张喻 , 江海霞 , 闫文亮 , 郭栋良 , 杨亮杰 , 叶佳丽 , 王玥 , 谢丽琼

新疆大学生命科学与技术学院, 乌鲁木齐, 830046
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17卷, 第 15 篇   
收稿日期: 2018年06月21日    接受日期: 2018年07月24日    发表日期: 2019年05月09日

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CRISPR/Cas9 系统是一种新型基因编辑工具，准确编辑目标基因，广泛应用于动植物的基因编辑中。本实验构建了油用亚麻品种‘陇亚 10 号’FAD2 基因的 CRISPR/Cas9 基因编辑载体，以 CRISPR/Cas9 基因编辑技术为切入点，根据 Gene Bank 中公布的 FAD2 基因序列(DQ222824.1)在 FAD2 基因外显子部分运用 sgRNA 在线设计软件 CRISPR-P 2.0 对亚麻 FAD2 基因做脱靶分析，在外显子区域选取 2 个片段作为靶序列进行敲除。以潮霉素作为筛选标记，采用 Golden Gate cloning 法构建针对‘陇亚 10 号’FAD2 基因的CRISPR/Cas9 基因敲除载体，命名为 pYLCRISPR/Cas9-FAD2。将 pYLCRISPR/Cas9-FAD2 载体导入农杆菌并检测其稳定性，保存菌种以便后期利用农杆菌介导法转化‘陇亚 10 号’，为深入研究亚麻 FAD2 基因的功能提供参考。

亚麻；FAD2；CRISPR/Cas9；基因编辑