田霞 , 周仙莉 , 沈宁东 , 朱惠琴

青海大学农牧学院,西宁, 810016
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2019 年, 第 17卷, 第 22 篇   
收稿日期: 2018年06月13日    接受日期: 2018年07月15日    发表日期: 2019年05月23日

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本次试验以藏茴香叶片为试验材料，采用单因子设计和L16(45)正交设计试验相结合的方法， 对影响藏茴香 ISSR-PCR扩增结果的 Taq 酶、引物、 Mg2+、 dNTPs和 DNA用量进行优化，并在此基础上，筛选出最适的 循环次数和退火温度。结果表明正交试验各因素显著性为Mg2+浓度跃dNTPs浓度跃Taq 酶跃DNA用量跃引物浓 度。在25 滋L的反应体系中， Taq 酶1.0 U、引物0.6 滋mol/L、 Mg2+ 1.5 mmol/L、 dNTPs 0.20 mmol/L、 DNA 40 ng为最佳用量，最佳退火温度为55℃，最佳循环次数为30。用不同的引物和不同的藏茴香种质对优化的ISSR-PCR反应体系进行验证，表明确定的优化体系具有稳定性高、重复性好等特性。该反应体系的建立为藏茴香 ISSR标记的开发、种质资源的鉴定、遗传多样性分析和分子标记辅助选择育种等提供科学依据。

藏茴香；ISSR-PCR；体系优化；正交设计；单因素试验