田莉莉 , 牛良

中国农业科学院郑州果树研究所, 农业部果树育种技术重点实验室, 郑州, 450009
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2013 年, 第 11卷, 第 18 篇   doi: 10.3969/mpb.011.000783
收稿日期: 2013年03月01日    接受日期: 2013年04月08日    发表日期: 2013年05月06日

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苹果病毒病是影响我国果树生产的一大重要难题。为培育抗病植物新材料，本研究采用Gateway技术构建了苹果抗病毒三价RNAi植物表达载体并对烟草进行遗传转化。先用RT-PCR分别克隆获得了苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）、苹果茎沟病毒（ASGV）和苹果茎痘病毒（ASPV）外壳蛋白基因保守区段，并用重叠延伸PCR方法获得了902bp的串联片段用作干扰片段；通过TOPO克隆将该片段克隆入载体pENTR/SD/D构建了入门克隆载体pENTR/SD/D-ACLSV-ASGV-ASPV；再经LR反应使入门克隆载体上的干扰片段替换目标载体pHELLSGATE12上的ccdB基因，形成了含有3种苹果病毒CP基因片段的RNAi表达载体pHELLSGATE12-ACLSV-ASGV-ASPV，用冻融法将其转入农杆菌菌株EHA105，以此作为工程菌转化烟草，经PCR鉴定表明目的基因片段已成功转入烟草中。本文RNAi表达载体构建和转化烟草的成功，为通过RNAi诱导转基因植物发生转录后基因沉默，及获得抗多种病毒的抗病果树新材料奠定了基础。

苹果；抗病毒；RNAi表达载体；烟草；遗传转化